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分离胶最新娱乐体验_分离胶浓度选择参考表(2024年12月深度解析)

内容来源：毛坦厂SEO所属栏目：话题更新日期：2024-11-29

分离胶

WB实验配胶小贴士，轻松搞定！配胶是WB实验中至关重要的一步，想要成功配胶，不手忙脚乱？以下是一些实用的小贴士： 𐟧頩斥…ˆ，确定需要几孔的梳子，以及要跑的蛋白分子量多大。根据分子量选择不同浓度的分离胶。如果你使用的是普利莱的配胶试剂盒，这将变得非常简单，因为一个浓度可以覆盖10-300kd，无需再选择不同浓度。 𐟤— 配胶前要做好充分准备： 1⃣️ 用流水冲洗玻璃板，可以使用洗洁精彻底清洗。 2⃣️ 清洗后，用纯水再次冲洗，然后用吸水纸擦干。 3⃣️ 将两块玻璃板对齐，放在制胶架上，检查是否压紧按实。如果有缝隙，会漏胶。 4⃣️ 检查所需试剂是否足够，不要在配胶过程中中途找试剂，特别是乙醇，容易忘记。 5⃣️ 使用前将AP涡旋混匀（一般从-20℃取出，化冻后需混匀）。如果你使用的是普利莱的配胶试剂盒，这一步可以省略，因为它不需要单独加AP，也不需要单独加Temed（味道刺鼻，使用时需憋气）。 6⃣️ 准备好所需的移液枪和枪头，避免配胶过程中发现缺少枪头。同时，找到配对的梳子。 7⃣️ 将所有试剂加入后，涡旋混匀，然后灌胶。 8⃣️ 加入分离胶后，立即用纯水或乙醇压平液平面。实际上，用纯水压平也是可以的，不一定非要用乙醇。 9⃣️ 剩余的试剂可以先保留，用于观察。 𐟑€ 通过这些步骤，你可以轻松地完成WB实验的配胶部分，提高实验效率和成功率，同时获得规整的条带。实验习惯可能因人而异，但这些小贴士可以帮助你更好地准备和进行实验。

SDS-PAGE电泳：揭秘分离秘诀大家好！今天我们来聊聊SDS-PAGE电泳，这是一种根据蛋白质分子量分离蛋白质的神奇方法。SDS-PAGE如何根据分子量分离蛋白质？𐟔슊在SDS-PAGE中，SDS（十二烷基硫酸钠）是一种阴离子去污剂。它和蛋白质结合后，会掩盖蛋白质本身的电荷差异，让蛋白质带上统一的负电荷，并展开其天然构象。这个过程有两个关键作用：破坏蛋白质结构：SDS能破坏蛋白质的二级和三级结构，使其成为线性分子。这样一来，不同蛋白质的迁移速度就不再受其结构影响。稳定结合比例：SDS与蛋白质的结合比例非常稳定，通常1.4g SDS结合1g蛋白质。这样每个蛋白质分子获得的负电荷与其质量成正比，电荷密度基本相同。因此，在SDS处理后，蛋白质在电场中的迁移速度只由其分子量决定。较小的蛋白质能更容易通过凝胶的孔隙，迁移得更快；较大的蛋白质受到更多阻力，迁移得较慢。由于SDS掩盖了蛋白质本身的电荷差异，SDS-PAGE可以精确地根据分子量进行分离，而不是依据蛋白质的形状或电荷。为什么使用两种不同的凝胶（浓缩胶和分离胶）？𐟧ꊊ在SDS-PAGE中，凝胶分为浓缩胶和分离胶，它们有不同的聚丙烯酰胺浓度和pH值。浓缩胶特点：浓缩胶的聚丙烯酰胺浓度较低，孔隙较大，pH值为6.8。作用：浓缩胶的主要作用是将样品中的蛋白质集中到一个非常窄的带中。在电泳过程中，所有蛋白质不论大小，都会在浓缩胶中高速迁移并聚集在界面处，使蛋白质在到达分离胶之前不会被分离。目的：使样品在进入分离胶之前排列整齐，确保所有蛋白质从同一条线上开始分离。分离胶特点：分离胶的聚丙烯酰胺浓度较高（通常为8%-15%），孔隙较小，pH值为8.8。作用：根据蛋白质的分子量对其进行真正的分离。由于分离胶的孔隙较小，较小的蛋白质能够更快通过凝胶，而较大的蛋白质则移动得较慢，最终根据大小分开形成条带。目的：分离胶根据分子量分离蛋白质。较高的聚丙烯酰胺浓度使得凝胶孔隙变小，增加了蛋白质分子移动的阻力，有效地分离大小相近的蛋白质。篇幅有限，更多细节请查看图片。

WB制胶小技巧：让你轻松搞定蛋白电泳制备WB胶其实有很多选择，不同试剂盒和不同浓度的胶都会影响最终的结果。首先，你需要根据自己的样品数量选择合适的胶厚度，比如15孔还是10孔。为了确保每次加样品的总蛋白量一致，这样内参才会对齐。常见的胶厚度有0.75mm、1.0mm和1.5mm三种。如果你的上样量很大，比如超过10，建议不要选择0.75mm的胶，因为容易飘起来加不进去。关于胶浓度，这也是根据你要分离的蛋白大小来决定的。一般来说： 6%分离胶：适用于75-200kDa的蛋白 8%分离胶：适用于50-150kDa的蛋白 10%分离胶：适用于23-120kDa的蛋白 12%分离胶：适用于18-100kDa的蛋白 15%分离胶：适用于10-40kDa的蛋白这些胶浓度指的是PAGE（聚丙烯酰胺）的浓度，浓度越高，形成的网状结构越致密，越有利于小蛋白通过。打个比方，两个人跑的差不多快，10米他们几乎同时到终点，不好比较。那我们可以选择多设障碍（网状结构），就容易区分了，跑得快的更加明显。为什么要两层胶呢？下层胶叫做分离胶，起分离蛋白的作用。上层叫做浓缩胶，浓度是5%。这浓度几乎起不到分离作用，主要是让蛋白从5%突然到10%受到了阻碍，前面的人跑不动了，后面的人还不知道，就一直往前推，就会在两层胶中间被压缩，变成条带状，更有利于比较。所以浓缩胶不宜过长，一般1-2cm为佳。在操作过程中，一定要洗净玻璃板后，让长板短板下缘齐平，放到制胶架中测试是否漏水、5min。再倒掉，倒扣晾干或者是滤纸吸尽水，特别是底部才能开始制作。制胶离心管洗干净，有可能上一个人有残余胶，会影响你的胶。分离胶制备完成以后，可上下轻晃10次左右，尽快加入胶槽中，提前备好水/异丙醇压齐。分离胶高度到梳子下缘越1-2cm。等待时间看说明书或者是看制胶离心管的胶状态，一般15-25min。倒掉异丙醇略微晾干，就可以制备浓缩胶了。要点是尽量不要有气泡，打液体不要一下到底。制备完成以后，可以放入running buffer，或者是保鲜膜保存。可保存两三天。有人说4度冰箱，但是我老师更加推荐室温。希望这些小技巧能帮到你，让你的WB实验更加顺利！𐟒ꀀ

WB配胶小技巧，轻松搞定电泳实验！大家好，我是实验室的小透明，不是大佬，但有些小经验愿意和大家分享。希望我的小心得能帮到你们，如果有不同意见，欢迎讨论，但别喷我哦，我可是有一颗钢化玻璃心的！洗板子的小窍门 𐟧𜊩斥…ˆ，板子一定要洗干净！不干净的板子可能会导致漏胶。我一般不用纸擦干板子，因为会有纸屑残留。洗干净后，我会把板子放在架子上的烘箱里烘干，这样板子会非常干净。如果板子不干净，滑动的时候会感觉有阻碍，干净的话就会像丝绸一样顺滑～防止漏胶的小技巧 𐟚犦œ‰些同学在加分离胶的时候发现胶漏了。为了防止漏胶，首先要确保短板和长板的底部没有大的坑坑洼洼。配胶下面的软垫尽量平滑，不要有坑坑洼洼，否则容易漏。短板和长板合起来后放在卡槽里，捏着卡槽的两端左右晃动，让玻璃板自然下坠，这样就不容易漏了。自从我从师兄那里学了这招，再也不用担心我的胶漏啦～分离胶的配制 𐟧ꊥˆ†离胶的浓度大家应该都知道，按照配方配没什么问题。每块分离胶的体积大概在6～7ml（建议多配一点，留在软管里，可以用来观察胶是否凝固了）。左右来回慢慢移动加胶，加到板子约2/3处，用无水乙醇压平（加无水乙醇后会有明显的分界线），等其凝固。浓缩胶的配制 𐟍‡ 分离胶凝固后把无水乙醇倒掉，等其挥发就可以加浓缩胶了。每块浓缩胶按照2～3ml配，上层胶凝固的很快，加入浓缩胶后应尽快插梳子（注意梳子是1.5还是1.0的），千万不要等它有点凝固的时候再插。如果一次性配很多块胶的话，我会加一个插一个。上样前的等待 ⏳ 浓缩胶凝固后最好不要立即上样，等半个小时后再上样效果更好～配胶的话，我感觉主要是熟能生巧，可能有一些没讲到的地方欢迎大家补充～今天做实验站了一整天，只有中午吃饭的时候用了半个小时，私信就明天回复吧，大家原谅我，我太累了。

LC3A实验攻略𐟔劰Ÿ“Š 跑小分子蛋白的朋友们，来看看这个详细的实验流程吧！这里以LC3A（14/16kDa）为例，分享一些实用的技巧。 𐟔砥ˆ𖨃𖯼š 分离胶：15%的分离胶，适合1.5mm的板。一般配15ml。浓缩胶：5%的浓缩胶，配10ml。分离胶少加一点，浓缩胶多加一点，这样可以让条带更平整。 ⚡ 电泳：电压：80V（30min）后，改为100V，直到溴酚蓝距离底部1cm以上。 𐟔„ 转膜：膜：0.22的PVDF膜。电流：150mA，45min。之前试过200mA，但效果不如150mA好。 𐟥› 封闭：用5%的脱脂牛奶封闭2小时。 𐟧𔠤𘀦Š—和二抗：一抗过夜。回收抗体后，洗膜（每次10min，洗三次）。二抗。洗膜（每次15min，洗三次）。 𐟓𘠦˜𞥽𑯼š最后一步，显影即可。希望这些小技巧能帮助你更好地进行小分子蛋白实验！

WB分离胶和浓缩胶的完美配方指南 𐟓– 想要得到漂亮的WB条带？首先得有一块好的胶！这里为你整理了一份常用的WB分离胶和浓缩胶的配方，供你参考。𐟔 𐟒ᠥ𐏨𔴥㫯𜚨𐃦•𔤸™烯酰胺和水的比例可以轻松调整胶的浓度。例如，如果你需要9%的胶，以20ml为例，可以尝试加水8.5ml，丙烯酰胺6.1ml，其他成分保持不变。这样你就能得到8%-10%之间的胶了。 𐟓 配方总结：分离胶（以20ml为例）：水：14.5ml 丙烯酰胺：3.2ml 甲叉双丙烯酰胺：0.3ml 10%过硫酸铵：0.1ml TEMED：0.004ml 浓缩胶（以20ml为例）：水：12.5ml 丙烯酰胺：4.7ml 甲叉双丙烯酰胺：0.2ml 10%过硫酸铵：0.1ml TEMED：0.004ml 使用这些配方，你的WB条带一定会更加清晰、漂亮！𐟌Ÿ

实习护士必看！一分钟掌握采血管顺序嘿，实习护士们！𐟑‹ 采血管这事儿，听起来简单，但细节决定成败哦！今天我就来帮你们整理了一份超实用的采血管使用指南，绝对让你一分钟内记住所有顺序和注意事项！不同采血管的用途红管：采血后不需要摇匀！主要用于临床血清生化、电解质、甲状腺功能、药物检测、艾滋病检测、肿瘤标记物和免疫学检测。黄管：采血后要立即颠倒摇匀8次！包含促凝剂和分离胶，适用于血清生化、电解质、甲状腺功能、药物检测、艾滋病检测、肿瘤标记物、PCR和免疫学检测。蓝管：采血后也要摇匀8次！抗凝管，全血2ml，添加剂是枸缘酸钠，抗凝剂与血液比例1:9。紫管：同样需要摇匀8次！抗凝管，全血2ml，添加剂是EDTA-K2，主要用于血常规、血涂片和血氨检测。绿管：采血后摇匀8次！抗凝管，全血4-5ml，添加剂是肝素锂抗凝，适用于血流变检测。黑管：采血后摇匀8次！抗凝管，全血4-5ml，添加剂是枸橡酸钠抗凝，抗凝剂与血液比例1:4。灰管：采血后摇匀8次！抗凝管，添加剂是草酸钾和氯化钠。浅绿色管：采血后摇匀8次！抗凝管，血浆4-5ml，添加剂是肝素锂和分离胶。采血管顺序口诀血培养+蓝+黑-红-黄-绿-紫-灰一个男(蓝)人很黑(黑)，过红绿灯要听指(紫)挥(灰) 拔针按压注意事项伸直手臂，用棉签按压穿刺点3-5分钟。采血后多休息。 24小时内避免洗澡。观察身体反应。希望这份指南能帮到你们，让采血管这件事儿变得简单又高效！𐟒ꠥŠ 油，实习护士们！𐟒ꀀ

wb跑电泳正常样子小分子蛋白，顾名思义，就是在WB（Western Blot）检测中小于20kDa的那些小家伙们。由于它们分子量小，容易降解，还带电量少，吸附能力自然也就弱了。所以，用常规的WB步骤来检测小分子蛋白，结果常常不稳定，时有时无，甚至可能出现转膜失败、蛋白弥散等情况。为了搞定这些小分子蛋白，我们需要对实验步骤进行一些优化，提高结果的准确性。上样量的选择 𐟓 通常来说，Western Blot每孔上样量是30-50。但如果你在检测小分子蛋白，上样量建议增加到50-100。这样可以减少蛋白在电泳时的弥散情况。电泳技巧 𐟚€ 配置SDS-PAGE胶时，选择高浓度的12%-15%分离胶进行电泳。同时，加大浓缩胶的比例，让浓缩胶与分离胶的比例约为4:6，甚至可以5:5。这样可以让小分子蛋白在浓缩胶中充分浓缩，减少后续分离时的弥散程度。电泳时，先用80V电压压缩40分钟，电泳至两种胶的界面。然后将电压调整到100V，在12%-15%的分离胶中进行电泳，跑到分离胶一半的位置。一般10kDa的marker能分开就可以了。这样可以避免长时间的电泳使得小分子蛋白弥散。转膜和封闭 𐟧ꊊ小分子蛋白由于其分子量小、易降解、吸附能力弱，所以在转膜时一般使用0.22的PVDF膜。转膜时不要在转膜液中加入SDS，防止小分子蛋白与PVDF膜无法结合。可以将甲醇的浓度提升至30%，增强蛋白与膜的结合性。实例详解：IL-8蛋白检测 𐟌쯸 IL-8蛋白（interleukin-8 protein）是一种促炎性细胞因子，大小约为11kDa，通常由许多细胞产生，包括巨噬细胞、内皮细胞和上皮细胞等。IL-8在免疫应答中发挥关键作用，包括诱导中性粒细胞等免疫细胞向炎症部位迁移，并刺激这些细胞的激活。在实际操作中，我们可以通过优化上述实验步骤来更准确地检测IL-8蛋白。希望这些技巧能帮助你在WB实验中取得更好的结果！

Abmart抗体真香！实验成功秘诀大公开 Abmart的抗体真的太好用啦！比国内很多抗体都有优势，效果明显，几乎没有杂带，真是国货之光。特别推荐他们的TLR4抗体，简直是我的实验神器。在使用抗体之前，我仔细阅读了说明书，了解了抗体的储存条件和稀释比例。显影后发现条带清晰，背景干净。我的实验步骤如下：提取细胞总蛋白：在冰上进行，确保蛋白的活性。加入loading buffer：收集完蛋白后，加入loading buffer，100度煮10分钟，让蛋白充分变性。 SDS-PAGE电泳：浓缩胶80V，分离胶120V，溴酚蓝跑到底，确保蛋白分离完全。转膜：这个过程特别重要，要注意排出气泡，PVDF膜在甲醇中激活，并且全程在冰浴中进行转膜。电转液要提前放在冰箱中预冷。电转条件为100V恒压，60分钟。封闭：提前一个小时配牛奶，室温封闭一个小时，确保背景干净。感谢Abmart提供这么好的抗体，让我的实验如此顺利！𐟒갟’

western blot详细步骤 𐟒禸…洗玻璃板并固定，长板后置短板前。 𐟓将板子放置于制胶架上，加入蒸馏水测试泄漏，静置15分钟。 𐟔쥐𘦰𔧺𘦓楹𒥐Ž，加入分离胶，液封，37Ⰳ恒温30分钟。 𐟓–按比例配置浓缩胶，混匀后灌入胶板。 𐟪㦏’入梳子，再放置37Ⰳ恒温50分钟。 𐟎‰完成制胶，准备进行Western Blot实验吧！𐟌Ÿ

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